Методы радиоиммунологического определения гормонов - блог доктора Минутко

      Методы иммуноанализа позволяют определять различные биологически активные вещества с чувствительностью от 10 (-6)М до 10 (-12) М и выше. Основным компонентом иммуноанализа являются антитела ( поликлональные и моноклональные) . Антитела , находящиеся в антисыворотке обычно имеют молекулярную массу более 150 кДа и принадлежат к классу иммуноглобулинов ( Ig). В антисыворотке доминируют IgG, IgA, IgM. Варианты в структуре аминокислотных остатков Ig определяют отличия в местах связывания антигена. При взаимодействии антитела ( Ab) и антигена ( Ag) образуется комплекс ( Ab:Ag) по формуле : Ab + Ag > Ab : Ag.

     Обязательным компонентом радиоиммунологического метода считается применение радиоактивной метки ( трития - 3Н или 125 I) с высокой удельной активностью. Регистрация сигнала проводится с помощью специальных гамма или бета счетчиков .

    Неизотопные методы исследования основаны на включении фермента в антитело или определяемый антиген . В качестве меченного компонента применяется пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза.

        Твердофазный иммуноферментный анализ ( ELISA) в настоящее время получил широкое распространение как при определении гормонов, так и оценки состояния антигенов рецепторов , в частности , чувствительных к разным нейромедиаторам. В этом методе в качестве твердофазных носителей применяются полистироловые микропланшеты. В ELISA коньюгаты антител с ферментом , реашируя с соотвествующими хромогенными субстанциями , образуют окрашенные соединения с определенными оптическими характеристиками . Данный метод считается более производительным по сравнению с классическими жидкофазными методами радиоиммуноанализа и иммуноферментного анализа. К недостаткам метода относят необходимость специальных анализаторов дляобеспечения высокой точности измерения . Свойства и качества полистироловых микропланшетов , используемых в ELISA изменяются от партии к партии и даже от лунки к лунке, что влияет на качество и воспроизводимость анализа.

     Методы тандем масс - спектрометрии ( MS/MS) и высокоразрешающего жидкостного хроматографа , обеспечивает высокую производительность и 100% специфичность , необходимую чувствительность и воспроизводимость , открывая тем самым новый этап в биохимии стероидов. Современная масс спектрометрия не требует сложной процедуры подготовки биологического материала.

Категория сообщения в блог: 

Добавить отзыв

CAPTCHA на основе изображений
Введите код с картинки