Высвобождение внеклеточных везикул (EV), включая небольшие экзосомы, полученные из эндосом (Exos, диаметр <100 нм), и крупные микровезикулы, полученные из плазматической мембраны (MV, диаметр> 100 нм), является фундаментальным клеточным процессом, который происходит во всех живых клетках. Эти везикулы транспортируют белки, липиды и нуклеиновые кислоты, специфичные для их клеток происхождения, и исследования in vitro подчеркнули их важность в качестве медиаторов межклеточной коммуникации. EVs были успешно выделены из различных биологических жидкостей, и особенно EV в крови были идентифицированы как перспективные биомаркеры для рака или инфекционных заболеваний. Представляет интерес протокол для стандартизированной изоляции и характеристики MV из образцов периферической крови. MV гранулируют из образцов антикоагулированной плазмы с ЭДТА методом дифференциального центрифугирования и обычно они имеют диаметр 100-600 нм.
Представляет интерес исследование микровезикул и экзосом (MV / E), высвобождаемых из клеток головного мозга в связи с нейродегенеративными заболеваниями. В последние годы внеклеточные везикулы стали предметом интенсивных исследований. Эти мембранные сферические структуры секретируются почти каждым типом клеток и участвуют в транспортировке клеточного содержимого от родительских к целевым клеткам. Воздействие передачи EVs наблюдалось при многих жизненно важных клеточных процессах, включая межклеточную связь и модуляцию иммунного ответа; таким образом, быстрая и точная характеристика белка внеклеточных везикул может быть актуальной как для научных, так и для диагностических целей.
Визуализация с помощью просвечивающей электронной микроскопии (TEM) также подтвердила характерную морфологию MV / E. Используя целевой метод иммуноблоттинга, можно наблюдать присутствие нескольких известных биомаркеров черепно - мозговой травмы ( TBI) , таких как продукты расщепления αII-спектрина (BDP), GFAP, его BDP и UCH-L1 в более высоких концентрациях в MV / E из TBF спинномозговой жидкости (CSF), чем их аналоги из контрольного анализа CSF. Кроме того, можно обнаружить пресинаптический концевой белок - синаптофизин и известный экзосомный маркер Alix, обогащенный MV / E из человеческого анализа после черепно - мозговой травмы (TBI) в спинномозговой жидкости ( CSF) .
Протеомный анализ на основе масс-спектрометрии с использованием nRPLC для двух контрольных и двух TBF-CSF-образцов выявляет 91 с высокой достоверностью в MV / E из контрольного анализма CSF, тогда как 466 белков были идентифицированы в аналоге TBI CSF. MV / E, выделенный из CSF человека, содержит цитоскелетные белки., а также белки, связанные с ростом нейритов, и синаптические белки, белки внеклеточного матрикса и субкомпонент В. С1q белка комплемента. Возможно, что такие специфичные для черепно - мозговой травмы изменения микровезикул и экзосом ( MV / E ) могут содержать межклеточные факторы связи, связанные как с сигналом гибели клеток, так и с процессами нейродегенерации.
Ранее было обнаружено, что ряд нейрональных и глиальных белков высвобождается в отдельно стоящей растворимой форме из культивируемых клеток головного мозга в клеточную среду. Эти высвобожденные везикулы на самом деле являются характерным представлением MV / E по морфологии (липидные двухслойные везикулы) и по размеру частиц (132-142 нм для CTX и 49-77 нм для клеток N2a). Можно идентифицировать белок нервного клеточного тела UCH-L1, маркер аксонального повреждения αII-спектрин и его продукты распада (SBDPs), астроглиальные маркеры GFAP и продукты его распада (GFAP-BDP), дендритный белок BIII-тубулин, синаптический белок синаптофизин и экзосому. маркер Alix в микровезикулах из клеток CTX и / или N2a.
Кроме того, SBDP, GFAP-BDP, UCH-L1 и синаптофизин особенно доминируют в MV / E, выделенном из клеток CTX, обработанных цитотоксином. Аналогично, SBDP, βIII-тубулин и UCH-L1 более отчетливо наблюдаются в клетках N2a, вызываемых цитотоксином. И, наконец, когда выделенные MV / E из A23187 или STS-стимулированных клеток N2a вводятся в здоровую культуру N2a, они способны вызывать цитотоксичность в последней. Эти исследования выявили тот факт , что микровезикулы / экзосомы, выделенные из здоровых и поврежденных клеток головного мозга, содержат определенные нейронные и астроглиальные белки, а также, возможно, другие цитотоксические факторы, способные распространять цитотоксические эффекты.
Добавить комментарий