Сегодня современные лаборатории предлагают контрактные исследования, передовые продукты для анализа протеома на геле и без геля (протеомика), идентификации белка, секвенирования белка и пептида, характеристики, анализа и картирования эпитопа с помощью масс-спектрометрии (MS).
Современные технологии и методы обычно используются для дифференциальных протеомных исследований, а также для количественной оценки и валидации регулируемых белков, биомаркеров и мишеней.
Для разделения сложных образцов применяют двухмерный гель-электрофорез с высоким разрешением, который теоретически позволяет разрешить до 10000 белковых пятен в 40 x 30 см 2DE гелях. В качестве методов без геля для глобального сравнения протеом используются методы изобарического мечения на основе LCMS, такие как протеомика iTRAQ и TMT, или подходы на основе nanoHPLC-ESI-MS / MS без меток.
Двумерный гель-электрофорез (2-DE) по-прежнему является эталонной технологией для отделения интактных белков от сложных смесей. Многие сотни различных белковых пятен могут быть отображены из сложных образцов. Proteome Factory предлагает чрезвычайно высокое разрешение 2-DE для разделения всех видов содержащих белок образцов. Белки с pI в диапазоне от 3 до 12 и молекулярной массой в диапазоне от 8 кДа до 200 кДа могут быть адресованы.
Разделение белка с помощью 2D-электрофореза с высоким разрешением используется для протеомики и, в частности, для:
- Каталогизации белков
- Анализа видов белков и распределения изоформ
- Анализа посттрансляционных модификаций
- Вестерн-блоттинга
- Контроля качества белков
- Контроля качества антител с помощью 2D вестерн-блоттинга
- Анализа белка клетки-хозяина
Если требуется абсолютное количественное определение, протеомика MeCAT полезна для исследования фармакокинетики белковых лекарств, позволяя проводить сверхчувствительную абсолютную количественную оценку интактных меченных лантаноидом MeCAT белков вплоть до низкого содержания белка в атомолах с помощью ICP-MS. Кроме того, фосфорилирование белка и встречающиеся в природе металлопротеины могут быть проанализированы путем количественного определения фосфора или других элементов с использованием ICP-MS параллельно.
Современные лаборатории специализируются на предоставлении полных услуг для полного секвенирования и характеристики белка с использованием комбинации N-концевого и внутреннего секвенирования белка Эдмана, ВЭЖХ, масс-спектрометрии MSMS и секвенирования пептидов de novo.
Масс-спектрометрия высокого разрешения используется для картирования эпитопов антител и идентификации, количественного определения и характеристики белков и пептидов, включая определение сайтов фосфорилирования и гликозилирования и, причем , необязательно, их структуры. Белки и пептиды идентифицируются с помощью обычных поисковых систем в базе данных или путем секвенирования пептидов de novo.
Добавить комментарий